产品介绍

rProtein A/G Magnetic IP/Co-IP Kit 是一款能够高效完成免疫沉淀（IP）及免疫共沉淀（Co-IP）实验的试剂盒。其包含高性能 rProtein A/G MagPoly Beads，能够实现快速便捷的磁性分离。另外试剂盒内经过优化的缓冲液，为免疫沉淀实验提供了良好的反应条件，增强了免疫沉淀实验的稳定性。聚合物磁珠的配体是重组蛋白 A/G（约 14 kDa），同时拥有蛋白 A 和蛋白 G 的 IgG 结合结构域，具有更广的抗体亚型结合范围。试剂盒的洗脱方式多样，既可以用低 pH 的洗脱液将免疫复合物从蛋白 A/G 磁珠上洗脱，也可以使用电泳上样缓冲液以变性条件洗脱免疫复合物，直接进行后续检测分析。


常见问题解答

1.试剂盒中，各组分的用途是什么？
rProtein A/G MagPoly Beads是磁珠，吸附抗体；
Lysis/Washing Buffer(5x)是缓冲液，使用前需用超纯水稀释到1x；
Lysis/Washing Buffer Enhanced是含去污剂的缓冲液，根据实验需求进行选择使用；
Elution Buffer是洗脱液；
Neutralization Buffer是中和液，选择低pH洗脱时会用到。

2.Lysis/Wash Buffer Enhanced终浓度是0.1%-1%，对于终浓度的选择有参考依据吗？
Enhanced用于细胞裂解时，终浓度选择1%；用于磁珠漂洗时，终浓度选择0.1%-0.5%。

3.什么是IgG阴性对照、设置阴性对照的意义是什么？
IgG阴性对照是作为与IP捕获抗体实验组相对应的阴性对照组，理论上IgG并不能特异性的与任何蛋白结合，可选用与IP捕获抗体相同物种来源的同型IgG作为阴性对照。设置阴性对照可以用于排除样本中非特异性与IgG结合的蛋白，消除样本背景，排除假阳性。

4.IgG阴性对照如何使用？
IgG作为一个独立的对照组（是IP一抗的对照）需要做与实验组完全相同的操作。简单来讲就是把它当作我们的IP捕获抗体去做整个IP实验流程，在后续的WB检测时，其IP产物作为一个独立样本同实验组IP产物一同进行上样检测。

5.什么是Input阳性对照？
免疫共沉淀实验中，会直接取细胞裂解液进行WB，用于验证细胞裂解液中确实存在目的蛋白。

6.说明书中，材料准备里面的二硫苏糖醇和蛋白酶抑制剂在哪里使用？
二硫苏糖醇（DTT）是还原剂，是加在loading buffer里面的，根据选用loading buffer的类型来进行选择添加；
蛋白酶抑制剂是为了防止蛋白降解，加在细胞裂解液中，根据实验需要进行选择添加。

7.变性洗脱和低pH洗脱的目的是不是不一样，哪种方案相对好一点？
低pH洗脱后，样品需要中和且蛋白有活性，洗脱体积较大，可以对蛋白做多种分析，比如质谱等检测，如果样品浓度低可能不方便后面分析；
变性洗脱（金属浴加热）会使蛋白失活，得到的样品可以直接跑电泳，一般只用于WB检测，能将磁珠上的蛋白都洗下来。
如果后面只进行WB试验，推荐变性洗脱。