产品介绍
ACE新推出的铁锤™超级裂菌液（TieChui™ E.coli Lysis Buffer）是一款高品质、高性能的裂菌液，适用于大肠杆菌的快速、温和、低成本裂解，释放蛋白。本产品为单组份，操作简单、重复性好。含有的溶菌酶可以在1分钟内破开细菌细胞壁，将其降解为胞壁二糖；含有的核酸酶可在1分钟内消化细菌的DNA和RNA，将其降解为寡聚核苷酸片段。使用本产品可以有效降低细菌裂解后上清粘度，抑制目的蛋白的降解，提高后续样品澄清效果，提升样品上柱纯化的效率，减少内毒素污染。

铁锤™超级裂菌液使用方法

1. 菌体收集
①对细菌进行培养，诱导表达目的蛋白。
②通过离心、超滤等适当方法，去除发酵液上清，收集菌体，对菌体进行称重，记录重量。
2. 菌体裂解
①1g 湿菌体加入 9 mL Tris-HCl 缓冲液对菌体进行重悬，确保分散充分，可采用旋涡震荡、磁力搅拌等手段。
注意：推荐使用TBS 缓冲液：20 mM Tris，150 mM NaCl，pH 7.6，不推荐磷酸盐（PBS），因其会抑制核酸活性，但抑制作用并不明显，如果使用 PBS 缓冲液，请适当延长裂菌时间。
② 按照菌体重悬液体积的 1/9（V/V）加入铁锤超级裂菌液，搅拌或振荡混合均匀。
例如：使用了 9 mL TBS 缓冲液重悬，就加 1 mL 铁锤超级裂菌液。
③将步骤 ②样品置于 4-25℃条件下（温度根据蛋白稳定性进行合理选择）裂解 1-10 分钟，会看到菌体悬液渐渐变清亮透明。
如果目的蛋白可溶，可以选择快速裂解，约 1 分钟即可释放 80%以上的目的蛋白至上清中；如果目的蛋白是包涵体，可以选择更长裂菌时间，尽量充分消化细胞壁，以便获得纯度更高的包涵体。
④使用离心（离心力＞8000 g）的方法，分离上清与沉淀。
如果目的蛋白为可溶蛋白，取上清进行后续纯化；如果目的蛋白是包涵体，收集沉淀样品，对沉淀中的包涵体进行洗涤、变性溶解，再使用适当方法进行纯化。

铁锤™超级裂菌液使用注意事项
① 本产品适用于革兰氏阴性菌的原核表达体系，代表性的有大肠杆菌。不适用革兰氏阳性菌。
② 本产品的保质期为-20℃一年，建议收到产品后进行分装保存，避免反复冻融。
③ 本产品里面没有破坏蛋白活性的成分，一般不会造成蛋白失活。
④ 本产品里面使用了温和的非离子型去垢剂，不需要再额外添加去污剂。
⑤ 因铁锤™超级裂菌液采用了溶菌酶消化细胞壁的策略进行破壁，会释放胞壁二糖成份，竞争结合麦芽糖结合蛋白的底物结合位点，因此本产品与 MBP-tag 纯化体系不兼容。其它常见的 His-tag、GST-tag、Tactin II-tag、FC-tag、S-tag、protein A-tag、CBD-tag 等技术体系不受影响。

铁锤™超级裂菌液常见问题及解答
1、为什么加铁锤™超级裂菌液加进去没有很快变澄清？
铁锤™超级裂菌液1-10分钟即可完成裂解，蛋白沉降需要时间，8000g离心5分钟即可澄清。跑个SDS-page即可验证。

2、有没有推荐的裂解时间？
5-10min效果最佳，包涵体可以适当延长时间。

3、重悬液一定要用PH7.6的TBS吗？
TBS效果最佳，PBS或其它含有磷酸盐的缓冲液会抑制超级核酸酶活性，使样本变粘稠，影响后续裂解及纯化。TBS  PH稍高或稍低可以用，但7.6效果最佳。

4、裂解是否需要另加蛋白酶抑制剂？
可以另加，但是我们裂解时间短，而且原核表达的蛋白本身不大容易降解，也可以不加。

5、用铁锤™超级裂菌液是否还可以超声、加热？
没必要超声，铁锤超级裂菌液基本可以做到完全裂解。
千万不要加热，会破坏裂解液酶活性。

6、包涵体是否适用铁锤™超级裂裂菌液？
用铁锤™超级裂菌液，延长裂解时间可以得到更加纯净的包涵体，且样本不会粘稠。大大利于后续蛋白的变性复性及纯化。