近年来，外泌体的研究热度持续攀升，受到越来越多的科研工作者的关注，与此同时也涌现了大量的外泌体相关课题。那么对科研工作者来说，需要了解外泌体的那些内容呢？上一篇我们对外泌体的定义、形成过程、外泌体的构成以及外泌体的研究应用做了介绍。那么外泌体是如何提取出来的，我们又是如何来鉴定我们提取的就是外泌体？接下来我们将一起来了解一下外泌体的提取和鉴定方法。

五、外泌体提取的方法
1超速离心法
超速离心法是最常用的外泌体提纯手段，先通过低速离心去除死细胞和细胞碎片，再通过高速离心将大小相同的囊泡从可溶性分子沉淀并纯化出来。优点操作简单，适用范围广。

2多聚合物沉淀法
PEG-base沉淀法是多聚物沉淀法中的一种，是最常见的多聚物，可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀。优点对分泌外泌体影响小、PH中性，无需特殊设备。

3磁珠法
PS亲和磁珠法：该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。
免疫磁珠法是CD63/CD81/CD9等抗体与磁珠结合，利用抗原-抗体原理捕获外泌体囊泡外的膜蛋白。是运用磁珠特异性的吸附外泌体表面的抗原进行免疫分离的方法。优点是提取的外泌体纯度高，不影响外泌体的形态完整。

4超滤离心法
超滤离心法是根据大小差异分离外泌体的方法，利用不同截留相对分子质量的超滤膜对样品进行选择性分离，小分子物质可以过滤到膜的另一侧，而大分子物质则被截留在超滤膜上。优点是简单高效，可浓缩外泌体样品，且不影响外泌体的生物活性。

5尺寸排阻色谱法
尺寸排阻色谱法是基于大小而非分子量实现分离大分子。优点是外泌体纯度高、结构和功能最大限度得以保留。
其他提取方法包括：密度梯度离心法、凝胶过滤层析法、微流控法等。

六、外泌体鉴定的方法
外泌体分离提取后，通常需要经过鉴定，来确认分离提取的是不是外泌体。国际细胞外囊泡学会（ISEV）在2014年的提议，外泌体鉴定3个标志：透射电镜（TEM）、粒径（NTA）、蛋白标志物（WB）。

1,透射电镜鉴定法：简称TEM，可对外泌体的形态和大小进行检测。外泌体的重要标志之一是双层囊膜结构，透射电子显微镜分辨率可达0.1 ~ 0.2 nm，可将被观察物体放大至数百万倍，非常适合进行外泌体双层囊膜超微结构观测。
2，粒径鉴定法：简称NTA，可对外泌体的大小进行检测。可快速、精准地分析外泌体粒径大小的分布情况，是鉴定外泌体存在的重要补充。
3，Western blot分子标记物鉴定法：外泌体自身特有的标志性蛋白（CD9、CD63、CD81、HSP70等），用Western blot对这些标志性蛋白进行检测，来鉴定证明外泌体的存在。