ECL化学发光试剂盒常见问题和注意事项

一、产品优势
①灵敏度高，发光强度时传统ECL的30-100倍；
②背景低，优化后的底物组成，有效降低了背景；
③稳定性高，通过优化配方，室温可稳定放置一年；
④选择灵活，多种灵敏度可选，满足不同需求；

二、常见问题解答

问题	原因分析	原因分析
胶片无条带显现或者信号较弱	转膜的效率低	用预染色分子量标准来判断，提高转膜效率
	抗原/抗体量少或不匹配	增加抗原/抗体量或选择合适抗原/抗体
	X光胶片有问题	X光片洗片以后应当为透明的胶片，如果全黑则说明已经完全曝光了，应当废弃
	定显影液有问题	可以先曝光一张胶片来验证，若有问题及时更换新的定显影液
	反应系统中HRP量过多	稀释HRP标记物
X光胶片背景脏	一抗、二抗浓度太高	降低抗体浓度，延长封闭时间
X光胶片背景脏	抗体未清洗干净	增加洗膜次数
条带有空斑	抗原以及二抗的浓度过高	稀释样品重新跑胶, 也可以将混合好的显色液冰浴后，加入到膜上，立即快速显色
条带不规则	转膜时有气泡也有可能是转印膜没有水化均匀剂盒	转膜时尽量优化条件

三、注意事项
①试剂盒Solution I为底物，保存于避光试剂瓶中，Solution II为氧化剂。通常取样顺序是先取底物Solution I, 换枪头后再取氧化剂Solution II。
②本试剂盒较为稳定，室温（25℃）可以保存一年以上，长期不用建议保存在2-8℃。
③使用生物素-亲和素系统时，避免使用牛奶封闭，可能会造成背景过高。
④金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点，避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子，可以使用平头塑料镊子。
⑤叠氮化钠抑制HRP的催化能力，在缓冲液中尽量避免使用叠氮化钠作为防腐剂。
⑥封闭、洗膜、孵育等步骤耗时较长，注意膜与塑料界面的摩擦不均匀可能造成部分位置条带消失，可以在保鲜膜中孵育以及封闭，洗膜的塑料盒底面不要有明显凸起，可以通过剪角的方法，区别转印膜有蛋白的一面。
⑦不同转印膜对蛋白的吸附能力不同，硝酸纤维素较软，避免出现折痕。PVDF膜使用前需要使用甲醇水化均匀。
⑧勿将多张膜置于同一个洗膜盒中洗膜，相互吸附以及摩擦可能造成很深的背景。
⑨转印、封闭、孵育都要避免气泡。

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