Magneti-Q 标签蛋白纯化试剂盒常见问题解答

常见问题

问题解答

试剂盒应用场景

1）小量表达，需要快速得到蛋白用于下游实验可用该系列试剂盒进行快速纯化；
2）只带有特定标签的蛋白可用该系列试剂盒进行快速纯化；
3）和Ni配体的磁珠相比，Magneti-Q His标签蛋白纯化试剂盒可以纯化表达低的蛋白，而获得纯度更高的蛋白；
4）可以做为最后一步精纯使用，有些实验如亲和力分析、蛋白测序、质谱分析对蛋白纯度要求高，可选择该系列试剂盒。

说明书中标注的1ml磁珠，是磁珠是1ml还是buffer加磁珠1ml？

1ml是磁珠体积、磁珠柱体积为20%。如磁珠规格是1ml的，柱体积为20%，到手的总体积是5ml。

偶联的标签抗体是什么种属的？

人源

磁珠能反复利用吗？

可以重复利用的。由于标签不同，再生之后的性质也不同，所以重复使用次数也不一样。
其中flag标签磁珠和His标签磁珠最多可以重复5次，Myc和HA最多3次。

铁锤+磁珠法纯化试剂盒，这个组合能搭配使用吗？

不建议搭配使用。
铁锤里面含有去污剂，纯化试剂盒里面的磁珠是抗体纯化磁珠，去污剂影响抗体和抗原的结合。

抗体标签蛋白纯化试剂盒中的buffer PH是多少呀？

A是酸性 pH 3.0，C是高盐 pH 8.0，D是变性 pH是7.4。

试剂盒中有三种洗脱液，说明书推荐四种洗脱液，如何使用？

缓冲液名称	优势	可能存在的问题
Elution Buffer A	能够增加洗脱载量	蛋白可能沉淀和变性,迅速加入中和液在一定程度上能逆转
Elution Buffer B	条件温和,不影响蛋白原有性质	洗脱载量会略低于酸洗脱
Elution Buffer C	中性洗脱,其洗脱效率高于酸洗脱	蛋白可能沉淀,也可能会影响蛋白间的相互作用
Elution Buffer D	能够完全将蛋白洗脱下来	洗脱的蛋白完全变性,有少量配体脱落

1）首次实验，不知道如何选择，推荐先用Elution C进行洗脱，洗脱后用20mM Tris缓冲液对半稀释后进行电泳检测；
2）明确蛋白耐酸的情况下建议客户使用Elution A进行洗脱；
3）不清楚目的蛋白是否耐酸，希望能够得到高活性的蛋白建议使用Elution B进行洗脱。

蛋白纯化试剂盒2ml或者1ml的能纯化多少量啊，是蛋白越大纯化量就会越少吗？

1ml磁珠20kd的蛋白理论载量2.5mg。
理论上来说蛋白越大，载量越高，但不同蛋白的性质不一样，比如标签裸露的位置跟蛋白的二级三级结构等都有关系，可以先用20ul做个小试，然后根据小试结果进行放大。

样品纯化后SDS-PAGE没有目的条带？

1）蛋白表达量太低，SDS-PAGE电泳原样看不到任何目的条带，导致最终纯化不到目的蛋白；
2）使用铁锤裂解液裂解细胞，铁锤裂解液中含有较高浓度的去污剂，影响抗体和抗原的结合，导致目的蛋白直接流穿，
改进方法是对于真核细胞表达的胞内蛋白，推荐用超声进行细胞破碎，能够提高蛋白的得率。

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