WB常见问题条带案例分析及解决方案

在WB实验操作过程中，易错细节很多，新手很少能跑出“完美条带”。

本文分享了WB实验样本处理（01-02）、上样（03-06）、电泳（07-012）过程中一些容易被大家忽略的实验细节、分析以及因为这些细节问题所导致的条带异常的12个实际案例，希望对大家之后的实验有所帮助。

01 样本降解
主要特征：目的条带向前拖尾。
解决方法：重新制备样品。

02 样品中有杂质 
主要特征：条带呈不规则形状或串珠状。解决办法：重新制备样品。
补救办法：样品在水浴锅中100℃煮5-10分钟，12000 rpm离心10分钟，取上清上样。（只能改善不能根本解决问题）。

03 上样量过大 
主要特征：超过每孔最大上样量后，泳道内蛋白条带无法分离，如左图中右侧泳道，右图为稀释后条带。
解决办法：减少每孔上样量（总蛋白量）建议每孔总蛋白不超过30 ug。

04 两侧有边缘效应，电泳图“外八字”
 解决办法：上样时保证每个泳道都加等体积且蛋白浓度相近的样品，如样品数量不够，可以用与样品等量的1x loading buffer补齐空孔。

05 loading沉降能力差  
主要特征：条带不呈扁平状，电泳快结束时条带出现发黄。
解决办法：更换loading。

06 loading buffer不足  
主要特征：电泳时不明显，在条带曝光时可以看到明显的后拖尾。
解决办法：增加loading的量，或更换loading。

07 电泳槽内槽漏液 
主要特征：电泳条带整体呈弧形或其他不规则形状，或电泳开始几分钟后就变得非常缓慢甚至停止电泳。
解决办法：重新安装胶板，保证内槽不漏液的前提下开始电泳。（每次把胶板夹好后，将内槽放入电泳槽，加满内槽电泳液，先不加外槽。观察不漏液的情况下再开始电泳）。

08 外槽缓冲液过多
主要特征：（电泳条带整体呈弧形或其他不规则形状，或电泳开始几分钟后就变得非常缓慢甚至停止电泳）出现这个情况的主要原因是没有检查内槽是否漏液，把外槽溶液加满，当内槽漏液时也无法观察到，出现的问题就是内槽漏液的问题。
解决办法：重新安装胶板，保证内槽不漏液的前提下开始电泳。（每次把胶板夹好后，将内槽放入电泳槽，加满内槽电泳液，先不加外槽。观察不漏液的情况下再开始电泳）。电泳槽上有刻度线的按照刻度线添加缓冲液，没有刻度线的保证外槽缓冲液液面比内槽要低，这样内槽漏液时可以及时发现。

09 外槽缓冲液过少 
主要特征：条带发黄。
解决办法：按照电泳槽上刻度线添加外槽电泳缓冲液。

10 电泳液体系错误  
主要特征：电泳时间长，且条带无法分离开，loading无法压成条状。
解决办法：使用配套的电泳缓冲液。

 

11 电泳缓冲液使用次数过多
主要特征：条带模糊，出现黄色条带。
解决办法：电泳2块胶时每次电泳结束后，将内槽缓冲液倒掉外槽缓冲液最多重复使用3次，电泳4块胶时电泳结束后内槽缓冲液倒掉，外槽缓冲液可以重复使用2次。

12 忘记撕胶条 
主要特征：通电后电源报错，无法开始电泳。
解决办法：用前注意撕掉电流开孔处的密封胶条。

以上就是小编总结的一部分WB常见问题条带案例分析及解决方案，希望能给广大客户的完美实验锦上添花。

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